Место действия — Украина. Время — начало XVIII века. Действие первое Картина первая Дом и сад Кочубея. Девушки приходят к Марии, дочери Кочубея, и зовут её с собою погадать о суженом. Мария отказывается: у отца в гостях гетман Мазепа, которого она любит. Друг ее детства казак Андрей, зная о тайной страсти Марии, признается тем не менее ей в беззаветной любви и уговаривает забыть Мазепу. Мария, понимая всю безрассудность своего чувства, все же не в состоянии бороться с ним. В сад выходят Кочубей, его жена Любовь, Мазепа и гости. Слуги Кочубея развлекают Мазепу песнями и плясками. Мазепа просит у Кочубея руки Марии. Кочубей и Любовь возмущены предложением старого гетмана – крестного отца Марии. Гетман обращается к Марии и предлагает выбор между собой и родителями. Она после мучительных колебаний отдает свою руку Мазепе. Гетман увозит Марию. Картина вторая Комната в доме Кочубея. Мать Марии оплакивает дочь, покинувшую отчий дом. Она торопит мужа отомстить Мазепе. Кочубей объявляет план мщения: он узнал о связях гетмана со шведским королем Карлом XII, о готовящейся измене Мазепы Петру I и решил выдать гетмана русскому царю. Андрей готов отдать донос в руки царя. Единомышленники Кочубея полны ненависти к гетману Мазепе. Действие второе Картина третья Подвал в Белоцерковском дворце Мазепы. Лживый гетман, предупрежденный о доносе приближенными Петра I, успел оклеветать Кочубея перед царем. Закованные в цепи и истерзанные, Искра и Кочубей ждут допроса. Входит Орлик — приближенный гетмана. Он требует у Кочубея выдачи клада, будто бы закопанного им в его деревне Диканьке. Ничего нет у Кочубея: его честь — поругана Мазепой, любимая дочь — отнята у него Мазепой. Только одного жаждет Кочубей — мести. Картина четвёртая Комната во дворце Мазепы. Гетман тайно принимает послов шведского короля. Входит Орлик, которому он отдает приказ о казни Кочубея. Появляется Мария. В разговоре с Мазепой она упрекает его в холодности к ней. Ревнивые подозрения томят ее душу. Нехотя гетман вынужден открыть истинную причину его холодности, он открывает ей тайну заговора против русского царя. Мазепа хочет знать, кого бы Мария предпочла – отца или супруга, если бы ей пришлось делать выбор? В смятении она говорит о беспредельности своей любви, ей непонятен выбор, который предлагает Мазепа. Мазепа уходит. Тайком пробравшаяся во дворец гетмана, появляется мать Марии, она рассказывает дочери о неудавшемся доносе на Мазепу и потрясена тем, что дочь не знает о готовящейся казни отца. Мария и Любовь спешат остановить казнь. Картина пятая Дорога, ведущая к месту казни Кочубея. Народ ждет появления обреченных, в толпе поет и пляшет пьяный казак. Проходят палач, затем Мазепа с Орликом, затем ведут Кочубея и его друга Искру. Осужденные прощаются друг с другом, с народом и жизнью и идут к эшафоту. Вбегают Мария и Любовь. Но они опоздали. Казнь свершилась. Действие третье Картина шестая Полтавский бой — симфоническая картина Картина седьмая Бывший дом и сад Кочубея. Разгар боя, русские воины преследуют шведов, среди них – Андрей. Он останавливается и вспоминает прошлое, в котором был счастлив. Появляются Мазепа и Орлик. Они бегут с поля сражения под Полтавой. Андрей, увидев Мазепу, бросается на него с ca6лей, но Мазепа опережает Андрея и, выстрелив, смертельно ранит. Появляется лишенная рассудка Мария, она ничего не узнает вокруг. Подавленная горем дочь страдает о казнённом отце. Орлик и Мазепа скрываются. Не узнавая умирающего Андрея, Мария убаюкивает его колыбельной песней.